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什么是色谱柱的分配系数和容量因子?二者是什么关系?
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什么是色谱柱的分配系数和容量因子?二者是什么关系?
来源:
医药科学
› 药学
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作者:
团子良
发表于 2022-12-27 15:25:19
电梯直达
在色谱仪分析检测过程中,分配系数和容量因子一定程度上展现色谱柱的柱效,了解影响色谱柱分离度的因素,有助于有效地使用和保养色谱柱,提高色谱柱分离度和色谱仪检测灵敏度。
分配系数是指在一定温度下,待测样品在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的浓度之比。分配系数与组分、流动相和固定相的温度、压力有关。在液相色谱仪中,固定相确定后,分配系数主要受流动相的性质影响。在试验中主要靠调整流动相的组成配比及pH值,以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间,达到分离的目的。
在流动相、固定相、温度和压力一定条件下,样品浓度很低时,分配系数只取决于组分的性质,而与浓度无关。在大多情况下,分配系数随着浓度的增大而减小,这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增大,分配系数也增大,这时色谱峰为前延峰。因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,分配系数恒定时,才能获得正常峰。
在同一色谱条件下,样品中分配系数值大的组分在固定相中滞留时间长,后流出色谱柱;分配系数值小的组分则滞留时间短,先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大,越容易分离,因此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。
分配系数K和分配比k的关系:
K=k·β
β为相比率,是反映各种色谱柱柱形特点的又一个参数,β=Vm/Vs,Vm为流动相的体积,即死时间(t0)与流动相流速的乘积,Vs为色谱柱中固定相的体积。对填充柱其β值一般为6~35,对毛细管其β值为60~600。
容量因子
是待测样品在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的量之比。因此容量因子也称质量分配系数。容量因子的物理意义:表示一个组分在固定相中停留的时间是不保留组分保留时间的倍数。分配系数为0时,化合物全部存在于流动相中,在固定相中不保留,停留的时间为0;分配系数越大,说明固定相对此组分的容量越大,出柱慢,保留时间越长。
分配系数K,容量因子k与保留时间之间有如下关系:
k=t'R/t0,t'R=tR-t0
上式说明容量因子的物理意义:表示一个组分在固定相中停留的时间(t'R)是不保留组分保留时间(t0)的几倍。k=0时,化合物全部存在于流动相中,在固定相中不保留,t'R=0;k越大,说明固定相对此组分的容量越大,出柱慢,保留时间越长。
容量因子与分配系数的不同点是
:k取决于组分、流动相、固定相的性质及温度,而与体积Vs、Vm无关;K除了与性质及温度有关外,还与Vs、Vm有关。由于t'R、t0较Vs、Vm易于测定,所以容量因子比分配系数应用更广泛。
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